等度高效液相色譜儀是一種基于液相色譜法原理設計的分析儀器，通過高壓泵將流動相（如甲醇、乙腈等）以恒定流速泵入色譜柱，樣品溶液經(jīng)進樣器注入后，隨流動相進入色譜柱。由于樣品中各組分在固定相（如C18、硅膠等）和流動相之間的分配系數(shù)不同，在色譜柱內(nèi)經(jīng)歷反復的吸附-解吸過程，導致移動速度產(chǎn)生差異，從而實現(xiàn)分離。分離后的組分依次流入檢測器（如紫外檢測器、熒光檢測器等），被轉化為電信號并傳輸至記錄儀，最終以色譜圖的形式呈現(xiàn)，用于定量分析樣品中的組分含量。
1、溶劑輸送系統(tǒng)（高壓泵與儲液器）
儲液器：用于儲存流動相（如甲醇、乙腈、水等），通常采用1-2L玻璃瓶或不銹鋼容器，配備耐腐蝕的鎳合金過濾器（孔隙2μm），防止顆粒進入泵內(nèi)。
高壓泵：提供穩(wěn)定的高壓（通常60-300×10?Pa），將流動相以恒定流速（如1mL/min）泵入色譜柱。常見類型包括：
往復式柱塞泵：通過柱塞往復運動實現(xiàn)連續(xù)輸液，流量恒定，抗溶劑腐蝕。
氣動放大泵：利用低壓氣體推動活塞，輸出高壓液體，適用于高精度需求。
2、進樣系統(tǒng)（進樣閥或自動進樣器）
六通進樣閥：主流進樣方式，通過旋轉閥芯實現(xiàn)樣品注入。分為：
部分裝液法：進樣量≤定量環(huán)體積的75%，依賴注射器熟練度，易產(chǎn)生峰展寬。
完q裝液法：進樣量≥定量環(huán)體積的3倍，確保完q置換流動相，提高重復性。
自動進樣器：可編程控制進樣體積、時間和順序，支持批量樣品分析，減少人為誤差。
3、分離系統(tǒng)（色譜柱與保護柱）
色譜柱：分離核心，通常由不銹鋼管制成，內(nèi)徑1-6mm，長度10-30cm，填充固定相（如C18、硅膠等）。固定相粒度5-10μm，理論塔板數(shù)可達1×10?/m。
保護柱：位于分析柱前，填充10-30μm顆粒，防止雜質污染分析柱，延長使用壽命。
柱溫箱：維持色譜柱溫度恒定（如25℃），避免溫度波動影響保留時間。
4、檢測系統(tǒng)（檢測器與信號轉換）
紫外吸收檢測器（UV）：常用，通過檢測樣品對特定波長紫外光的吸收實現(xiàn)定量分析。
光電二極管陣列檢測器（DAD）：可同時檢測多波長，提供三維色譜圖，用于峰純度鑒定。
熒光檢測器（FLD）：對熒光物質靈敏度高，適用于痕量分析（如多環(huán)芳烴）。
蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）：適用于無紫外吸收的物質（如糖類、脂類）。
信號轉換：檢測器將組分濃度轉化為電信號，傳輸至數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
5、數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)
記錄儀：實時記錄色譜圖，顯示保留時間、峰高等參數(shù)。
數(shù)據(jù)處理裝置：包括積分儀或計算機工作站，用于峰面積計算、定量分析、方法開發(fā)等。現(xiàn)代HPLC通常配備專業(yè)軟件，支持梯度洗脫程序編輯、報告生成等功能。
